Genregulation durch microRNAs

microRNA (micros = griech. klein), abgekürzt miRNA, sind kurze Ribonukleinsäure (RNA)-Moleküle, die eine wichtige Rolle in dem komplexen Netzwerk der Genregulation, insbesondere beim Gen-Silencing spielen. Sie binden spezifisch an mRNA (messenger RNA) und kontrollieren die Genexpression durch Regulation der mRNA-Stabilität und der Translation. microRNAs wurden 1993 erstmals beschrieben, der Name wurde jedoch erst 2001 geprägt.

Die Sequenzen für die miRNAs sind im Genom kodiert. Die verschiedenen miRNAs werden durch ein komplexes Polymerase-Splicing-System im Zellkern gebildet, processiert, in das Zytosol transportiert und dort letzendlich mit einer Länge von 17 bis 24 Nukleotiden aus der prä-miRNA herausgeschnitten werden. Heutzutage sind bis zu 932 unterschiedliche, menschliche microRNA-Sequenzen bekannt. Die maximale Anzahl humaner miRNAs wird auf ca. 1000 geschätzt.

Diese microRNAs regulieren die Expression der mRNAs auf vielfältige Weise. Ein einzelnes Gen kann von zu 9 microRNAs reguliert werden. Auf der andere Seite können bestimmte microRNAs die Expression von mehrere Hundert verschiedenen Genen beeinflussen. Die Entschlüsselung von Gen-microRNA-Netzwerken ist eine aktuelle Anforderung an die moderne Genomforschung. Dies kann nur durch bioinformatorisches Abgleichen von parallel durchgeführten microRNA Profiling und Whole Genome Arrays erfolgen.

Whole Genome Arrays für exprimierte humane Gene müssen ca. 25.000 verschiedene mRNA umfassen. Nur hierdurch läßt sich die differentielle Expression einzelner Gene in zwei Proben bestimmen. Im Gegensatz hierzu werden von den bisher ca. 932 bekannten, humanen miRNAs nur eine limitierte Anzahl davon in einzelnen Geweben erwartet und für eine spätere Differentialanalyse benötigt.

Analyse der microRNAs im IKDT Labor

Für den Nachweis der sehr kurzen miRNAs biete das IKDT Labor zwei Methoden an:

1. Die Hochdurchsatz-Bestimmung

von microRNA-Profilen mit TaqMan ® OpenArrays (Fa. LifeTechnologies-ThermoFisher)

2. Die quantitative Messung

von microRNA Profilen mit TaqMan ® microRNA Low-Density-Arrays (TLDA) auf Micro-Fluidic-Cards (Fa. LifeTechnologies-ThermoFisher)

Für beide Methoden ist eine spezielles Processing der RNA-Proben empfehlenswert.

Einer der ersten Dienstleister europaweit

Als einer der ersten Dienstleister in Europa ermöglichen wir Ihnen den sofortigen Zugang zu beiden innovativen Technologien. Sie wählen die gewünschte Methode, TaqMan Open Arrays oder TaqMan Low Density Arrays (TLDA) aus, stellen Ihr gewünschtes Set an microRNAs zusammen (dabei helfen wir Ihnen gern) und wir führen die Messung in unserem akkreditiertem Labor für Sie durch.

GmicroRNA Profiling mit TaqMan QPCR OpenArray Plates

Der Nachweis der sehr kurzen miRNAs kann direkt, nach entsprechender Reverser Transkription (RT), mit TaqMan OpenArrays (Fa. Life Technologies-ThermoFisher) oder mit der TaqMan Low-Density-Arrays (TLDA)-Methode (Fa. Life Technologies-ThermoFisher) erfolgen.

Nutzen Sie die TaqMan QPCR OpenArray™ Technologie (Life Technologies-ThermoFisher) und bestimmen Sie an einem Tag bis über 30.000 Datenpunkte in unterschiedlichen Formaten. Sie liefern uns Ihre biologische Probe. Die Umschreibung durch entsprechnende Megaplex-Pools und die Messung führt das IKDT Labor durch. Die Daten werden Ihnen danach elektronisch übermittelt.

Wenn Sie es wünschen, bekommen Sie eine kurze Vorauswertung Ihrer microRNA-Daten.

Auch hier können Sie dank der TaqMan Gene Expression Assay-Technologie der Fa. Life Technologies für jede humane microRNA ein optimiertes TaqMan-QPCR-System sofort bestellen und selektiv spezifische microRNA quantitativ in größeren Probenzahlen nachbestimmen

microRNA Profiling mit TaqMan Low-Density-Arrays (TLDA)

Nutzen Sie die TaqMan ® Low-Density-Arrays und bestimmen Sie quantitativ die Expression von den 667 häufigsten, humanen microRNAs in einer Probe.

Derzeit sind die Sequenzen über 2000 menschlichen microRNAs bekannt. Für das microRNA Profiling wurde ein neues TaqMan ® Low-Density-Arrays Set (siehe Abb. A) für die Messung der 667 häufigsten, humanen microRNAs entwickelt. Auf zwei Micro-Fluidic-Cards wurden je 377 (Pool 1) und 290 (Pool 2) kombiniert und erlauben die zeitgleiche und parallele Bestimmung der gewünschten microRNAs aus einer biologischen Probe. Sie können Ihre Proben auch nur auf einen von beiden Pools (A oder B) screenen.

Unser Service für Ihre Fragestellung

Wir können für Sie einzelne microRNAs quantitativ bestimmen oder Sie wünschen das komplette Profiling mit den TaqMan microRNA Low Density Arrays (667 humane microRNAs).

Was brauchen wir von Ihnen?

  • Benennung interessanter microRNAs für Ihr Problem oder bestellen Sie das microRNA Profiling

Was müssen Sie entscheiden?

  • Es soll eine Prä-Amplifikation durchgeführt werden!

Was tun wir für Sie?

  1. Auswahl Ihrer microRNAs für die TaqMan QPCR
  2. Isolation der miRNA aus Ihrer Probe
  3. Umschreiben der miRNA in cDNA
  4. Prä-Amplifikation der Probe (optional)
  5. Durchführung der TaqMan-QPCR im IKDT
  6. Übermittlung der Expressionsdaten an Sie
  7. Rückgabe oder Lagerung Ihrer prä-amplifzierten Proben

Vorteile für Sie

  • Optimierte TaqMan-QPCR Systeme für die Quantifizierung humaner microRNAs (derzeit ca. 2000 Systeme verfügbar)
  • Freie Kombination von kleinen Sets (z.B. Tumoren, Stoffwechsel-Pathways)
  • Sets auch für Maus, Ratte und andere Spezies erhältlich
  • schnell, preiswert und präzise
  • für nahezu alle Gewebe und Körperflüssigkeiten


Wir sind Ihr Partner fürs microRNA Profiling! Sprechen Sie mit den Spezialisten!

Weitere Informationen

Flyer microRNA (PDF, 590KB)